樣品處理

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g 離心 5min，取全部上清于 4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于 1mL 試劑一。

2. 細胞：按照細胞數量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后于4℃，10000g 離心5min，取全部上清于4℃、100000g 離心30min，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。

3. 血清：直接測定。

本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗室提供免費代測,7個(gè)工作日出結果,提供原始數據!

試劑組成和配制

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體×5 瓶，-20℃避光保存。臨用前根據用量每瓶加入4.5mL試劑二充分混勻。(3天使用完)

優(yōu)點(diǎn)如下：

1、快速簡(jiǎn)便：操作時(shí)間短，48-50T，可測40例樣本左右，96-100T,可測80例樣本左右；

2、取樣量微：常規操作取樣量50l， 酶標儀操作僅需5l即可檢測，部分試劑盒取樣多少請；

3、穩定性好：試劑盒2～8℃存放3個(gè)月有效；

4、再現性好：20倍稀釋線(xiàn)性仍然良好；

5、回收試驗： X =99%；

6、受外界影響因素?。焊蓴_因素少，重復性強；

7、測試面廣：可測動(dòng)物血清(漿)、組織、各種體液、灌流液、各種培養細胞以及細胞培養上清液等，部分試劑盒適用于檢測植物。

測定步驟：

1.加樣

1. 除包被外都需45度加樣

2.加樣體積要準確

3.管底加樣，不能加在管壁上

4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡

2.溫浴

1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規定的反應溫 度的水浴箱。

2.各ELISA板不應疊在一起。

3.為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。

4.加入底物后，反應的時(shí)間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實(shí)驗臺上，以便 不時(shí)觀(guān)察，待對照管顯色適當時(shí)，即可終止酶反應。

3.洗滌

1.洗滌在ELISA過(guò)程中不是反應步驟，但卻 是決定實(shí)驗成敗的關(guān)鍵。

2.目的是洗去反應液中沒(méi)有與固相抗原或 抗體結合的物質(zhì)以及在反應過(guò)程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

4.讀板

1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。

2.如用酶標儀測定結果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質(zhì) 量和軟件的算法。

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