无需付费真人直播视频,免费看大片软件,荡公乱妇第1章方情95视频,初六苏梅全文免费阅读正版

產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

首頁(yè) > 技術(shù)與支持 > 酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒試驗干貨分享
酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒試驗干貨分享
點(diǎn)擊次數:69 更新時(shí)間:2024-06-12

   酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒試驗指將可溶性的抗原或抗體吸附到聚苯乙烯等固相載體上,進(jìn)行免疫反應的定性和定量方法。

一、樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過(guò)程中如出現沉淀,應再次離心。

2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應該再次離心。

3. 尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時(shí),用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻進(jìn)行,提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

※注意:血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,以免影響檢測結果;如果樣本中的靶標物檢測濃度高于標準品的最高值,請將樣品做適當倍數稀釋后檢測,建議正式實(shí)驗前做預實(shí)驗以確定稀釋倍數。

二、操作步驟:

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?,用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

80 pg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

40 pg/ml 4號標準品 150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

20 pg/ml 3號標準品 150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

10 pg/ml 2號標準品 150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

5 pg/ml 1號標準品 150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.溫育:操作同3。

8.洗滌:操作同5。

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。

11.測定:以空白孔調零,450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

 

三、注意事項:

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開(kāi)封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn),最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。


百色市| 腾冲县| 兴国县| 康马县| 芮城县| 中超| 二连浩特市| 富民县| 莫力| 磐安县| 曲水县| 红原县| 长武县| 丰顺县| 菏泽市| 社会| 兴文县| 武义县| 永顺县| 香河县| 乐业县| 贞丰县| 江西省| 陆良县| 霍林郭勒市| 永靖县| 搜索| 吉林市| 南城县| 弥勒县| 临洮县| 麟游县| 麻阳| 同心县| 武威市| 嘉荫县| 买车| 马山县| 东海县| 阿拉尔市| 洪江市|